ⅠNukleino rūgštisiįvadas
Nukleino rūgštis skirstoma į dezoksiribonukleino rūgštį (DNR) ir ribonukleino rūgštį (RNR), tarp kurių RNR pagal skirtingas funkcijas skirstoma į ribosominę RNR (rRNR), pasiuntinio RNR (mRNR) ir pernešamąją RNR (tRNR).DNR daugiausia koncentruojasi branduolyje, mitochondrijose ir chloroforme, o RNR daugiausia pasiskirsto citoplazmoje.Nukleino rūgščių ekstrahavimas, kaip materialus genų ekspresijos pagrindas, atlieka itin svarbų vaidmenį molekulinės biologijos tyrimuose ir klinikinėje molekulinėje diagnostikoje.Nukleino rūgšties ekstrahavimo koncentracija ir grynumas tiesiogiai paveiks vėlesnį PGR, sekos nustatymą, vektoriaus konstravimą, fermentų virškinimą ir kitus eksperimentus.
Ⅱ Nukleino rūgščių ekstrahavimo ir gryninimo metodas
① Fenolio/chloroformo ekstrahavimo metodas
Fenolio/chloroformo ekstrahavimas yra klasikinis DNR ekstrahavimo metodas, kurio metu mėginiams apdoroti daugiausia naudojami du skirtingi organiniai tirpikliai, tirpinant DNR pagrindu pagamintą nukleorūgštį vandens fazėje, lipidus organinėje fazėje ir baltymus tarp dviejų fazių.Šio metodo pranašumai yra maža kaina, didelis grynumas ir geras poveikis.Trūkumai yra sudėtingas veikimas ir ilgas laikas.
② Trizol metodas
Trizolo metodas yra klasikinis RNR ekstrahavimo metodas.Trizol metodas po centrifugavimo chloroformu skirstomas į vandeninę fazę ir organinę fazę, kurioje RNR ištirpinama vandeninėje fazėje, vandeninė fazė perkeliama į naują EP mėgintuvėlį, įpylus izopropanolio gaunamos nuosėdos, o po to gryninama etanoliu.Šis metodas tinka RNR ekstrahavimui iš gyvūnų audinių, ląstelių ir bakterijų.
③ Išcentrinės kolonėlės valymo metodas
Centrifugos kolonėlės gryninimo metodas gali adsorbuoti DNR konkrečiai per specialias silicio matricos adsorbcijos medžiagas, o RNR ir baltymai gali praeiti sklandžiai, o tada naudoti didelės druskos, mažo PH, sujungti nukleino rūgštį, mažai druskos didelės PH vertės eliuavimą, kad atskirtų ir išgrynintų nukleino rūgštį.Privalumai yra didelė gryninimo koncentracija, didelis stabilumas, nereikia organinių tirpiklių ir maža kaina.Trūkumas yra tas, kad jį reikia centrifuguoti žingsnis po žingsnio, daugiau veikimo etapų.
④ Magnetinių karoliukų metodas
Magnetinių granulių metodas yra padalinti ląstelės audinio mėginį per lizatą, atpalaiduoti mėginyje esančią nukleino rūgštį, o tada nukleorūgšties molekulės yra specialiai adsorbuojamos ant magnetinio karoliuko paviršiaus, o priemaišos, tokios kaip baltymai ir cukrus, paliekamos skystis.Ląstelių audinio skaidymo, magnetinių granulių surišimo su nukleino rūgštimi, nukleino rūgšties plovimo, nukleino rūgšties eliuavimo ir kt. žingsnių galiausiai gaunama gryna nukleorūgštis.Privalumai yra paprastas valdymas ir trumpas naudojimas, be žingsnio centrifugavimo.Jis turi žemus techninius reikalavimus ir gali realizuoti automatinį ir masinį veikimą.Dėl specifinio magnetinių granulių ir nukleino rūgšties derinio ekstrahuojama nukleino rūgštis yra didelės koncentracijos ir grynumo.Trūkumas yra tas, kad dabartinė rinkos kaina yra gana brangi.
⑤ Kiti metodai
Be minėtų keturių metodų, yra verdantis krekingas, koncentruotos druskos metodas, anijoninio ploviklio metodas, ultragarso metodas ir fermentinis metodas ir kt.
Ⅲ Nukleino rūgšties ekstrahavimo tipas
Foregene turi pirmaujančią pasaulyje tiesioginio PGR platformą, dviejų stulpelių RNR izoliavimo platformą (tik DNR + tik RNR).Pagrindiniai produktai yra DNR/RNR išskyrimo rinkiniai, PGR ir tiesioginių PGR reagentų molekulinės laboratorijos reagentų serijos.
① Bendra RNR ekstrakcija
Bendri RNR ekstrahavimo mėginiai apima kraują, ląsteles, gyvūnų audinius, augalus, virusus ir tt Aukšto grynumo ir didelės koncentracijos bendros RNR galima gauti ekstrahuojant bendrą RNR, kuri gali būti naudojama atliekant RT-PGR, lustų analizę, transliaciją in vitro, molekulinis klonavimas, Dot Blot ir kiti eksperimentai.
Susijęs su foregenuRNR izoliavimo rinkiniai
Gyvūnų bendros RNR izoliacijos rinkinys--Greitai ir efektyviai išgaukite labai gryną ir kokybišką bendrą RNR iš įvairių gyvūnų audinių.
Ląstelių bendros RNR izoliacijos rinkinys--Iš įvairių kultivuotų ląstelių per 11 minučių galima gauti labai išgrynintą ir aukštos kokybės bendrą RNR.
Augalų bendros RNR izoliacijos rinkinys--Greitai ištraukite aukštos kokybės bendrą RNR iš augalų mėginių, kuriuose yra mažai polisacharidų ir polifenolių.
Viruso RNR izoliavimo rinkinys- Greitai išskirkite ir išvalykite virusinę RNR iš tokių mėginių kaip plazma, serumas, kūno skysčiai be ląstelių ir ląstelių kultūros supernatantai.
② Genominės DNR ekstrahavimas
Genominės DNR ekstrahavimo mėginiai apima dirvožemį, išmatas, kraują, ląsteles, gyvūnų audinius, augalus, virusus ir kt. Genominės DNR ekstrahavimas gali būti naudojamas fermentų virškinimui, DNR bibliotekos konstravimui, PGR, antikūnų paruošimui, Western blot hibridizacijos analizei, genų lustui, aukštam - pralaidumo sekos nustatymas ir kiti eksperimentai.
Susijęs su foregenuDNR izoliavimo rinkiniai
Gyvūnų audinių DNR izoliavimo rinkinys- Greitas genominės DNR ekstrahavimas ir išgryninimas iš kelių šaltinių, tokių kaip gyvūnų audiniai, ląstelės ir kt.
Kraujo DNR midi rinkinys (1-5 ml)- Greitai išvalykite aukštos kokybės genominę DNR iš antikoaguliuoto kraujo (1-5 ml).
Bukalinio tampono / FTA kortelės DNR izoliavimo rinkinys- Greitai išvalykite aukštos kokybės genominę DNR iš žandikaulio tamponų / FTA kortelės mėginių.
Augalų DNR izoliavimo rinkinys- Greitai išvalykite ir gaukite aukštos kokybės genominę DNR iš augalų mėginių (įskaitant polisacharidus ir polifenolio augalų mėginius)
③ Plazmidės ekstrahavimas
Plazmidė yra tam tikra žiedinė mažos molekulės DNR ląstelėse, kuri yra įprastas DNR rekombinacijos nešiklis.Plazmidės ekstrahavimo būdas yra RNR pašalinimas, plazmidės atskyrimas nuo bakterijų genominės DNR ir baltymų bei kitų priemaišų pašalinimas, kad būtų gauta santykinai gryna plazmidė.
„General Plasmid Mini“ rinkinys- Greitai išvalykite aukštos kokybės plazmidinę DNR iš transformuotų bakterijų, kad galėtumėte atlikti įprastinius molekulinės biologijos eksperimentus, tokius kaip transformacija ir virškinimas fermentais.
④ Kiti ekstrahavimo tipai, miRNR ekstrahavimas ir kt.
Gyvūnų miRNR izoliavimo rinkinys- Greitai ir efektyviai iš įvairių gyvūnų audinių ir ląstelių išskirkite mažus 20-200 nt miRNR, siRNR, snRNR RNR fragmentus
Ⅳ Nukleino rūgščių ekstrahavimo ir gryninimo rezultato reikalavimais
① Užtikrinti pirminės nukleino rūgšties struktūros vientisumą.
② Sumažinkite baltymų, cukrų, lipidų ir kitų makromolekulių trukdžius
③ Nukleino rūgščių mėginiuose neturėtų būti organinių tirpiklių arba didelės koncentracijos metalo jonų, kurie gali slopinti fermentą.
④ Ekstrahuojant DNR turi būti pašalintas RNR ir kitų nukleino rūgščių užteršimas, ir atvirkščiai.
Paskelbimo laikas: 2022-11-24
